Extracellulære vesikler (EVs) er membran-omsluttede partikler, som indeholder RNA og proteiner fra celler, og frigives til bl.a. urin og blodprøver. Forståelse af hvordan EV’erne bidrager til fx sygdomme er vigtigt for design af nye behandlinger og diagnostiske metoder, men analysen af EV’er med flowcytometri er vanskelig pga. er EV’ernes størrelse på 50-200 nm. Dette kræver special designet udstyr.

Instrument specifikationer:

• 4 lasere (co-lineære, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 638 nm)

• 5 sidescatter (SSC) detektorer (V-SSC1, V-SSC2, B-SSC, Y-SSC, R-SSC)

• 6 fluorescens detektorer (V-477/60, B-531/46, Y-595/50, R-670/30, R-710/47, R-792/64)

• Automatisk startup/shutdown og QC

• Automatisk sensitivitets måling

• Automatisk volumen måling

• Automatisk baseline måling

• Integreret udvidet/dybdegående rens af instrumentet

• Indbygget kontinuerlig monitorering af renhed af buffer og instrument

• SSC-sensitivitet ned til 50 nm på silica-beads og med tydelig adskillelse af beads med 10 nm størrelsesforskel.

• Eksport af data i FCS 3.1 format

Disse specifikationer er nødvendige for vores forskning og lever op til internationale retningslinjer (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36759917/). Instrumentets høje sensitivitet og opløsningsevne, kombineret med de 11 detektorer gør det muligt at lave en detaljeret karakterisering af komplekse prøver indeholdende EV’er fra mange celletyper på enkelt EV-niveau. Dette er essentielt for EV-forskningen ved SDU.

Den ønskede CytoFLEX nano fra Beckman Coulter er det eneste instrument på markedet der med high-throughput kan detektere 6 unikke markører på én gang på partikler under 80 nm i størrelse. Desuden giver instrumentets 5 side-scatter detektorer en udvidet mulighed for at skelne EV med forskelle i opbygning og størrelse. Dette muliggør en unik og stor indsigt i EV’ernes komplekse sammensætning. Det er desuden af afgørende betydning at dataformatet fra CytoFLEX nano lever op til internationale standarder for rapportering af EV-data, idet det giver mulighed for scatter-kalibrering på baggrund af beads af varierende størrelse og materiale samt eksport af rådata i det internationale .fcs format.

Markedet er undersøgt ved internet søgninger, samtaler med kolleger, og firmastande ved EV-konferencer.

Kun ét instrument på markedet kan opfylde kravene til vores EV-karakterisering. Andre tilgængelige instrumenter, selvom de kan konkurrere på størrelsesmæssig opløsning, kan ikke detektere mere end 2 fluorescensmarkører ad gangen, hvilket er utilstrækkeligt. Desuden lever deres dataformater ikke op til internationale standarder.

Det er unikt at CytoFLEX nano kontinuerligt måler på stabilitet og renhed af instrumentet, samt har en indbygget rensefunktion. Dette betyder, at vi får data i højere kvalitet.

Konklusion. Kun CytoFLEX nano lever op til vores krav og behov for vores EV-forskning.

Det er efter SDU's bedste overbevisning, at der kun kan leveres fra denne leverandør på grund af manglende konkurrence af tekniske årsager.